探研克隆微粒子病检测灵敏度办法

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1材料与方法

由浙江大学动物科学院蚕蜂研究所提供，分别设置103spore/ml、105spore/ml、107spore/ml等3种不同浓度。供试蚕品种：“无毒”秋丰、白玉原种，由浙江省蚕种质量检验检疫站提供。供试“无毒”母蛾：由浙江省蚕种质量检验检疫站提供一样本检验“无毒”的二样本蛾盒。饲养和感染供试的“无毒”秋丰、白玉原种，由浙江省农科院蚕桑研究所按DB33/T217.4-2007《桑蚕种繁育规程》饲养至4龄大眠，提供给浙江大学动物科学学院添毒用大眠蚕1600条；浙江大学动物科学学院蚕蜂研究所在5龄起蚕时，分别添食103spore/ml、105spore/ml、107spore/ml等3种不同浓度的微粒子虫孢子悬浮液。添毒后按常规方法饲养至化蛹，鉴别雌、雄蚕蛹备用。制种试验区雌蛹化蛾当天下午14~16时按无性克隆制种方式摘除输卵管和蚕卵，摘除输卵管和蚕卵后的蛾体60℃烘干后备检。对照区雌蛹化蛾后与对交品种雄蛾交配产卵，产卵的母蛾待自然死亡后60℃烘干备检。微粒子病灵敏度检测将感染母蛾与“无毒”母蛾以1∶27的比例混合。母蛾镜检由浙江省蚕种质量检疫检验站按DB33/T217.3-2007《桑蚕种母蛾检疫规程》3.6规定的检疫流程进行磨蛾、过滤、离心、镜检，调查检出率。以“无毒”母蛾（28蛾/盒）镜检结果作为阴性对照数据处理使用MicrosoftExcel2003程序，对试验数据进行方差分析，百分数进行Sin-1（P）1/2转换。

2结果与分析

不同制种方式的母蛾微粒子病检出率将雌蚕无性克隆（试验区）和常规交配制种（对照区）的母蛾微粒子病检出率进行了统计分析2.2不同制种方式的母蛾微粒子病检出率方差分析对不同制种方式、不同感染浓度母蛾微粒子病检出率作无重复双因素方差分析。通过分析发现，不同感染剂量对母蛾微粒子病检出率影响显著：F（剂量）=13.494＜Fcri（t临界值）=5.143P（概率）=0.006＜0.01而不同制种方式对母蛾微粒子病检出率没有表现出明显差异：F（制种方式）=1.828＜Fcri（t临界值）=4.757P（概率）=0.242＞0.05综合以上检测数据，可以发现实验区与对照区的微粒子病检出率没有显著差异，说明摘除卵管和蚕卵的母蛾对微粒子病的检疫没有产生不良影响。

3讨论

本次试验表明，雌蚕无性克隆和常规交配制种条件下的母蛾微粒子病检出率没有显著差异，说明雌蚕无性克隆繁殖方式下的母蛾对微粒子病的检疫没有产生不良影响。母蛾只要受到微粒子病感染，按1：27的比例混合，即使摘除卵管和蚕卵，其检测灵敏度也是足够的。不同感染剂量对微粒子病检出率有显著差异，暗示了不同感染剂量对母蛾感染率有显著影响，添食剂量达到一定浓度，母蛾100%感染。以上结果为制定雌蚕无性克隆系原种检疫标准提供相关的数据。

作者：徐杰鲁兴萌单位:浙江省蚕种质量检验检疫站