生物技术在植物检疫检测的应用

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【摘要】通过对免疫学以及分子生物学等领域的研究，新型的生物技术得以衍生出来，其在使用的过程中能够快输的将植物中存在的有害生物检测出来，从而为植物的健康生长繁育做铺垫。总之，生物技术的研制与应用，提高了植物检疫检测的工作效率，本文作者认为在长期实践的配合下，现有的生物技术也会不断的创新改良，其在植物检疫检测中成为常规的检疫检测手段将不会是天方夜谭。

【关键词】生物技术；植物检疫；检测；运用

随着我国对外开放政策的编制与实施，国际贸易活动开展的越来越频繁，尤其是加入WTO之后，在植物检疫检测工作中，免疫学技术以及核酸技术这些生物学技术获得了很大的应用空间，使传统的检测手段渐渐退出应用的平台。本文对免疫学技术、核酸技术这两种生物技术的在植物建议检测方面应用进行分析[1]，认为生物技术的会有更大的发展前景。

一、免疫学技术

1.酶联免疫法

2.在上个世纪70年代，酶联免疫吸附技术（ELISA)被研发，在植物检疫检测中能够快速的将植物病毒、真菌以及MLO检测出来。

（1）病毒方面：

将植物种子中的大豆花叶病毒(SMV）、苜蓿花叶病毒（AMV)、烟草环斑病毒（TRSV）检测出来；作用于蚜虫这一介体昆虫身上，能够将马铃薯卷叶病毒（PLRV）与黄瓜花叶病毒(CMV）检测出来；对于果树、苗木这类植物，酶联免疫法的应用使温州柑桔矮缩病毒(SDV）、扇叶病毒(GFLV)、李坏死环斑病毒(PNRSV)等病毒的诊断与检测工作顺利的运行。

（2）真菌方面：

生物技术在植物建议检测中的应用主要借助ELISA试剂盒将腐霉、黑盘菌，其中ELISA试剂盒中培育土壤悬浮液就能够精确的将大豆根茎组织中存有的大豆疫霉菌检测出来，这是因为土壤大豆疫霉菌的孢子、卵孢子以及菌丝都处于游动的状态中，隐地疫霉存在于大豆根茎病组织中，在悬浮液的作用下疫霉游动的孢子就被顺利的检疫检测出来；在类菌原体方面，免疫技术也得到了切实的应用，例如其可以将植物体内的翠菊黄化病、桃X病、花生丛枝病这些MLO病害检测并鉴定出来；

（3）细菌方面

：免疫学技术对水稻条斑性病细菌的检测起到了极好的成效，灵敏度可达102～103个菌/mL。其实酶联免疫法的检测样式也是多样化的，最具代表性的就是DASMELISA，其利用酶与底物产生的颜色与抗原含量成正比的原理，而广泛应用于植物病毒的定量检测中。

2.免疫荧光技术

简称IF，在植物检测中是以抗体为基础的一种检测方法，在植物组织、种子以及土壤中细、真菌的检测中都取得了较好的应用效果。该技术目前将菜豆萎蔫病菌成功的检测出来，因为其灵敏度较高的优势使假阳性反应问题得以避免或者是杜绝；IF在土塘根组织的辣阑疫霉、樟疫霉，根茎组织中的芸苔根肿菌、组织切片中的菌丝所取得的检测效果优于ELISA。而免疫荧光技术分为两种类型，即为直接与间接免疫荧光技术，与直接免疫荧光技术相比间接免疫荧光技术拥有更大的应用空间，这是由于其能将一抗、二抗有机荧光素能够完美的结合为一体，此时在免疫荧光显微仪器道德作用下发射出的荧光性质就被检测出来。例如含有荧光色素抗体的细菌阳性细胞在IF的配合之下在显微镜下顺利的检疫检测出来，此时IF的灵敏度在103～105cfu/mL范围之内，这一生物技术的应用，使荧光细胞的数量清楚的显现出来，同时其形态特征也是清晰化的。

3.斑点免疫法

简称DIA技术，其是借助生物酶对抗体进行标记，将其吸附在硝酸纤维素膜（NC)或者是其他支持物之上，但是这些支持物必须满足与抗原特异性结合的属性，在底液的作用下NC膜上产生颜色、形态各异的有色斑点。这一免疫学检测方法在植物病毒、MLO的检疫检测中得到广泛的推广与应用。目前DIA技术将那些从荷兰进口的石竹香石竹环斑病毒、在从美国进口的马铃薯脱毒组织培养苗中将PVX、PVY等病毒顺利的检测出来；此外DIA技术对烟草环斑病毒、烟草脉斑驳病毒、番茄花叶病毒等MLO病害的检疫检测达到了一定的效果。DIA技术一般分为直接法、间接法、双抗体夹心法，其自身携有灵敏度高、操作简单、检测结果保存时间长的优势，成为了现代植物病害检测中快速诊断检测有效方法之一。

二、核酸技术

1.核算探针

其利用同位素或非同位素能够把互补核酸序列中的部分寡聚核苷酸检测出来的一项生物技术，在植物病虫害诊断、病原物的检测都有应用，前者将柑桔病毒病、兰花病毒病、香石竹环斑病毒病等检测出来；病原物分为类菌原病（桃X病、玉米丛矮病等）、类病毒（柑桔裂皮病、椰子败生类病毒等）以及植物病原细菌（线虫等）检测出来。该技术的杂交检测方法是多种多样的，利用率最高的是印迹杂交法，其灵敏度比ELISA高出2~3级，该杂交探针在植物病毒、类病毒、类菌原体检疫检测中拥有极大的应用空间；

2.RFLP技术

作为一种DNA检测技术，能够将植物中存有的病原物种、变种、专化型和生理小种迅速的诊断检测逼格鉴定出来，例如与线虫存在亲缘关系的马铃薯金线虫与马铃薯白线虫，作用于北方根结线虫能够将A和B两个生理小种检测并辨别出来；在真菌方面，RFLP技术在mtDNA的辅助下将大豆疫霉菌和苜蓿疫霉精准的区分出来。

总之，这一分子生物学技术具有灵敏度高、被检样品需求量少、结果产生快速以及操作简易等特点，其在植物病毒检疫方面具有较大的优势。结束语：与植物辐照等多种传统检疫检测技术相比较，无论是免疫学技术还是核酸技术，其凭借灵敏度高、精准性好、产生结果迅速等优势迎来了大量的使用者。但是由于造价成本高等外在条件的制约，这些生物技术仅仅在科研单位得到切实的应用，但是我们相信随着我国科学技术的不断的发展，这些生物技术存在的缺陷会及时的得到弥补，应用流程将会越来越简单，免疫学技术与核酸技术将会成为植物病害、病毒、细菌检测鉴定的常规手段。

参考文献

[1]朱延书,康宁.生物技术在植物检疫检测中的应用[J].江苏林业科技,2003,03:42-47.

[2]王炳奎，吴庆，陈金跃．辐照技术在植物检疫中的应用［J］．农业科技通讯，2010(4):100-102

作者：赵红梅单位：宣恩县森林植物检疫站