肺癌细胞技术论文

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一、资料与方法

1、挑选本院2010年6月至2012年12月送检病理科支气管镜刷检细胞学标本252例。所有的患者最后均确诊为肺癌。男184例，女68例，年龄44～85岁，(平均66．3岁)。所有的患者行支气管镜刷检，同时薄层液基细胞学涂片与传统涂片。

2、仪器:美国SurPathTMPrepstain全自动液基薄层细胞制片染片机(BDTriPath，BurlingtonNC，USA)及相关耗材。采用奥林巴斯电子支气管镜(BF-260或1T260工作镜)进行检查。镜下发现肺癌的直接征象或间接征象者，根据胸部CT提示的病变行透视下支气管镜肺活检。所有患者均在活检部位采用南京微创一次性保护型细胞刷刷检，将毛刷头直接在玻片上常规涂片1张。再将毛刷头置于盛有10mlCyteRichRed固定液的50ml离心管中充分震荡漂洗收集细胞。

3、制片方法

3.1传统涂片方法:纤维支气管镜刷头直接涂抹于载玻片上，涂片1张，干燥，95%乙醇固定10min，常规HE染色镜检。

3.2BDTriPath制片方法:标本加入专用50ml离心管中，使用程控离心机以Hettich3#程序600r/min离心10min，迅速管架倒置180°倾出上清液，加入CyteRichRed固定液20ml，静置30min，Hettich的3#程序以600r/min离心10min，迅速管架倒置180°倾出上清液，涡漩混合器振荡均匀，加入10mlTris缓冲液，混均，移至12ml的离心管，Hettich的4#程序以600r/min离心5min，迅速管架倒置180°倾出上清液，涡漩混合器振荡(15±5)s。管架放在PrePStain系统上，静置10min，等待上机自动制片染色。

4、判断标准:涂片诊断采用正常、可疑癌细胞、癌细胞三种分类方法，后两项为阳性标本。尽量由同一位医师操作电子支气管镜采集标本，由两位细胞病理学医师同时阅片镜检，以找到癌细胞为阳性。

5、统计学方法:统计学处理数据采用SPSS10．0软件包进行χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

二、结果

两种涂片质量比较:传统涂片，涂片范围大小不一，涂片背景红细胞白细胞多，细胞分布厚薄不均，胞质核浆结构对比不明显，胞核染色质均一模糊、核仁不清;支气管镜刷检细胞标本LCT制片后，细胞集中于涂片范围直径15mm专用玻片上，细胞界限清楚，涂片背景干净清晰，细胞分布单个散在或成团分布，有立体感，胞质着色鲜艳、易于观察，胞核核膜分明，核内染色质及核仁清晰可见。薄层液基细胞学涂片诊断肺癌阳性率为58．33%，(146/252)，其中中央型肺癌98例，周围型肺癌48例。传统涂片诊断肺癌的阳率为33．19%，(84/252)，其中中央型肺癌68例，周围型肺癌16例。液基薄层细胞学与传统涂片的阳性率的差异有统计学意义P＜0．05。

三、讨论

支气管镜刷检细胞学标本应用传统涂片方法制片，受细胞新鲜程度、细胞量、出血及炎性背景、制片技术等因素影响，造成背景不清晰、涂片细胞易重叠、厚薄不均、细胞形态不易观察、有意义细胞数量偏少，容易出现假阴性或假阳性结果，漏诊重要病变。液基薄层细胞学制片技术(LCT)是近年来出现一种制片技术的革新，明显优于传统巴氏涂片的检查方法，其中有代表性的是BDThiPth离心沉降技术和新柏氏(ThiPthTCT)模式技术。两种方法工作原理不同，分别为重力沉降式和过滤膜式，已经广泛成熟应用于宫颈细胞学检查和TBS诊断报告，对比传统巴氏涂片，宫颈癌及癌前病变(低度鳞状上皮内病变和高度鳞状上皮内病变)检出率大大提高，标本采集及制片质量的优越性是传统涂片技术无法比拟的，特别是BDThiPth制片技术在细胞数量、背景去除非诊断性杂质、全自动制片染色及诊断质量尤为突出。美国FDA认证:超柏式液基薄层细胞学检查是所有液基细胞学技术中检出率最高的技术。2005年美国病理协会非妇科细胞学实验室比较液基制片方法与传统制片方法在体液样本检测能力，证实液基制片方法更容易检出肿瘤。

对比传统涂片，LCT制片使细胞在载玻片上分布均匀，厚薄一致，细胞数量多，集中于15mm范围内易于阅片，核染色质着色鲜明，核浆对比效果好，易于观察核结构，染色背景清晰，制片质量十分满意，阳性率显著提高。LCT制片技术和诊断质量体会:支气管镜刷检由于全部收集或大部分收集送检标本，最大程度保留病变细胞，尤为适用LCT制片方法;液基涂片中的细胞核可能不如传统涂片中那样深染，但细胞核异型性是判读恶性或可疑恶性病变的重要重要标准，一般认为核占优势、核浆比例高、核膜不规则、染色质凝块状、核仁清或多个小核仁为恶性证据;巴氏染色胞浆在区分腺癌或分化鳞癌很有帮助，前者胞浆见空泡，后者胞浆橘黄色、含角蛋白;仔细观察成团核深染的细胞，如怀疑异常，在背景中全面寻找单个异型细胞更有意义;提高制片质量显著，但诊断阳性率的改善还需病理诊断医师勤于积累，LCT在支气管镜刷检细胞标本应用时间及应用范围还比较晚，对同一份标本同时进行普通涂片，以积累经验，减少误诊。

支气管镜检查是目前诊断肺癌的常规检查方法，刷检联合组织活检的重要手段。传统支气管镜黏膜细胞学检查是在支气管镜检查过程中用支气管毛刷直接在普通玻片上涂片，诊断率低。LCT对肺癌有更高的诊断率。国内也有少量文献报道。本研究结果显示，经过与组织病理学对照，普通涂片法检出敏感度为33．19%，而LCT检出敏感度为58．33%，较普通涂片法提高了25．14%，差异有统计学意义(P＜0.05)。

四、总结

细胞病理学是肿瘤病理诊断的重要组成部分，应用LCT明显增加肿瘤细胞数和改善涂片质量，便于观察核浆结构，显著提高诊断阳性率，拓宽了支气管镜刷检细胞学检查的技术手段，有利于细胞病理学的标准化和规范化发展，值得临床推广使用。

作者：蔡志明刘建南吴琪茵