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本文作者:覃宝山覃勇荣作者单位:河池学院化学与生命科学系
二氧化氯作为一种新型的广谱消毒剂,具有用量少、作用快、效率高等优点而被广泛应用于水处理、食品工业、农业、水产及医疗卫生等领域[1-6]。近年来,二氧化氯也逐渐应用于食用菌栽培领域[7-10]。在食用菌栽培过程中,必须防止其他微生物的污染,传统的防治方法是利用常压蒸汽灭菌法或高压蒸汽灭菌法对培养料进行灭菌[11-12]。这两种灭菌方法,需要投入大量的人力和物力,对设备的要求较高,灭菌过程耗时、耗能,栽培成本比较高,与当今推行的节能减排、绿色种植理念不符。因此,寻找一种新的方法和手段替代传统的灭菌工艺具有重要意义。对此,笔者等以二氧化氯为消毒剂对平菇进行栽培试验,探讨二氧化氯浓度、活化时间及消毒时间对平菇菌丝生长及杂菌的防治效果,以期寻找简便可行的消毒方法指导生产实践。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1供试菌株
平菇P615,江苏省江都市天达食用菌研究所。一级菌种培养基为PDA培养基,扩繁1次;二级和三级菌种参考文献[11-12]的方法,以谷粒和桑枝屑为基质进行制作。
1.1.2试验药剂
秀霸牌稳定态二氧化氯一元粉剂〔二氧化氯含量(10±0.8)%〕,购自山东潍坊华实药业有限公司。
1.1.3栽培原料
栽培配方:桑枝70%、米糠20%、稻草6%、石膏2%、五氧化二磷2%。所有原料均要求新鲜、干燥、无霉变,试验前将稻草、桑枝切碎备用。
1.2方法
1.2.1试验设计
采用二氧化氯浓度、活化时间和消毒时间3个因素进行单因素试验。将一定量的稳定性二氧化氯粉剂倒入水中,搅拌溶解后,密闭静置一定时间,即可得到所需浓度消毒液。活化时间是指将配制二氧化氯消毒剂的水溶液密封放置至拌入培养料所经历的时间。消毒时间是指二氧化氯消毒剂水溶液拌入培养料至接种时料袋放置的时间。每种处理均设5个平行。试验数据处理用Excel2003进行,结果取平均值。
1)二氧化氯浓度。二氧化氯浓度(处理1~10)分别为20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L、100mg/L、120mg/L、140mg/L、160mg/L、180mg/L和200mg/L,活化时间10min,消毒时间72h。
2)消毒时间。消毒时间(处理1~10)分别为12h、24h、36h、48h、60h、72h、84h、96h、108h和120h,二氧化氯浓度120mg/L,活化时间10min。
3)活化时间。活化时间(处理1~10)分别为2min、4min、6min、8min、10min、12min、14min、16min、18min和20min,二氧化氯浓度为120mg/L,消毒时间为72h。
1.2.2栽培方法
按试验设计要求配制相应的消毒剂稀释液,将培养料与消毒剂稀释液混合拌匀,用47cm×23cm×0.05cm的聚乙烯塑料袋装料并编号,每袋折合干料1kg,然后按要求放置一段时间,定时接种。接种时,在酒精灯旁的无菌区内进行,所用的原种菌袋表面、接种钩和手在接种前用75%的酒精消毒,接种时将菌种均匀撒播在袋口料面,稍加按压后套上塑料颈圈,外加消过毒的报纸封口。接种后进入菌丝培养管理,期间注意通风、避光,保持干燥,根据当时气温灵活堆码发菌,并定时翻袋,控制料温。菌丝长满菌袋后,继续培养5~10d,促进其进一步成熟。当料口有淡黄色分泌物出现时,转入出菇管理阶段。及时增加光照,喷水,加强通风,拉大温差,促进原基形成。当菌袋口料面分化出珊瑚状的菌蕾时,将封口的报纸去掉,期间注意保湿,通风换气,菇体成熟后适时采收。
1.2.3观察与记录
定期观察与记录杂菌感染情况和平菇菌丝生长状况,统计菌袋感染数,测量菌丝的生长速度,计算菌丝的平均生长速度及菌袋感染率。生长速度=菌丝长度/天数平均生长速度=每次测出的生长速度之和/次数菌袋感染率=(感染的菌袋数/栽培的菌袋数)×100%
2结果与分析
2.1二氧化氯浓度、消毒时间和活化时间对杂菌的防治效果
不同浓度的二氧化氯消毒剂拌料栽培平菇,对杂菌防治效果不一样。二氧化氯浓度为120~200mg/L的处理对食用菌杂菌的防治效果较好,感染率为0,二氧化氯浓度低于120mg/L的实验处理均有杂菌感染,感染率为40%。说明,二氧化氯浓度过低对杂菌的防治效果不明显。不同消毒时间对杂菌防治的效果良好,感染率均为0。表明,试验设定的消毒时间对杂菌的防治效果没有影响。即二氧化氯消毒剂在10min内活化后配制成120mg/L的浓度拌入培养料,料袋放置12~120h后再接种,均可有效防治杂菌污染。不同活化时间对杂菌防治的效果良好,感染率均为0。说明,试验设定的活化时间对杂菌防治的效果没有影响,即二氧化氯消毒剂在2~20min内活化后配制成120mg/L的浓度拌料,料袋放置72h后再接种,均可有效防治杂菌污染。
2.2二氧化氯浓度、消毒时间和活化时间对平菇菌丝生长的影响
从表中看出:
1)二氧化氯浓度。处理1~6二氧化氯浓度低于或等于120mg/L,平菇菌丝萌发较早,生长速度较快,长势较旺;处理7~10二氧化氯浓度高于120mg/L,平菇菌丝萌发较晚,生长速度较慢,长势较弱。原因是在相同消毒时间内,二氧化氯浓度过高,其在培养料内的残存量较多,在杀灭杂菌的同时也抑制了平菇菌丝的生长。
2)消毒时间。处理1~5消毒时间低于72h,菌丝萌发较晚,菌丝色泽淡白,粗细与整齐度一般,长势较弱;处理6~10消毒时间等于或高于72h,菌丝萌发较早,菌丝较粗、较密,整齐度较好,长势较旺。原因是料袋内二氧化氯的残存量与消毒时间有关,随着消毒时间的延长,残留在料袋内的二氧化氯相对减少,其对平菇菌丝生长的抑制作用也随之减弱。
3)活化时间。平菇菌丝在2~5d内萌发,各种不同处理的平菇菌丝长势略有差异。其中,处理1、处理3和处理5~6的菌丝洁白,比较整齐,长势较好;处理7~10菌丝稀疏不整齐。原因是活化时间与二氧化氯的释放有关,在配制二氧化氯水溶液时,二氧化氯释放的量通常随活化时间的增加而逐渐增大,直至一定水平后保持不变。
3讨论与结论
1)试验结果表明,低浓度二氧化氯处理对杂菌的防治效果不明显,感染率较高,高浓度二氧化氯处理对杂菌的防治效果较好;消毒与活化时间对杂菌防治效果的影响不大,其原因有待研究。但在生产实践中,要获得良好的生物学效益,必须考虑消毒时间与活化时间对食用菌菌丝生长的影响。
2)虽然高浓度的二氧化氯对杂菌的防治效果显著,但同时也抑制了平菇菌丝的生长。这是因为高浓度的二氧化氯在培养料内残存量较多,对平菇菌丝的生长有抑制作用,尤其在接种初期更为突出。因此,利用二氧化氯消毒剂拌料栽培平菇时,不能单方面从杀灭杂菌的角度考虑二氧化氯剂量,还要考虑二氧化氯对平菇菌丝生长的影响,从而获得更高的生物学效益。消毒时间对平菇菌丝生长有一定的影响。培养料内二氧化氯的残存量与消毒时间有关,随着消毒时间的延长,残留在料袋内的二氧化氯相对减少,其对平菇菌丝生长的抑制作用也随之减弱,所以消毒时间短,平菇菌丝长势较弱;消毒时间长,平菇菌丝长势较旺。活化时间与二氧化氯的释放有关,二氧化氯释放速度对平菇菌丝生长影响的机理有待进一步研究。
3)二氧化氯作为一种新型的消毒剂,越来越多地应用于食用菌栽培领域,在生产实践中,为了获得最佳的效益,必须综合考虑二氧化氯的浓度、消毒时间以及活化时间三者的优化组合。在当前大力推广绿色种植、生态工艺、节能减排的形势下,利用二氧化氯消毒剂拌料栽培食用菌具有积极的意义,虽然它可以代替传统的灭菌方法,简化栽培工艺,降低栽培成本,节省人力物力,但是食品安全问题不容忽视。在食用菌栽培过程中使用二氧化氯消毒剂,有必要对药物残留及相关问题做进一步的调查论证,以确保安全。