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本文作者:胡嫦谈家金叶建仁潘玉雯作者单位:南京林业大学森林资源与环境学院
植物线虫在自然界里分布广泛,几乎每一种栽培植物都受到线虫的寄生与危害。近10多年来,我国园林苗木生产规模不断扩大,出口园林苗木业发展迅速,但苗木上的寄生线虫一直限制其出口创汇。为了查明园林苗木根际寄生线虫的种类,笔者从江苏省常州地区一苗木出口基地采集多种园林苗木的根际土壤,对其中的寄生线虫进行了分离鉴定,以期为进一步研究线虫病害的检疫和防治奠定基础。
1材料与方法
1.1样品的采集
2010年4月6日从江苏省常州地区金坛市一苗圃内采集24种园林苗木的根和根际土壤。24种园林苗木是:蒲苇(1年生),芦竹(5年生),黄菖蒲(2年生),银边麦冬(3年生),金边麦冬(2年生),花菖蒲(2年生),鸢尾(3年生),海寿花(1年生),金边丝兰(6年生),金森女贞(半年生),银枝小蜡(1年生),扶芳藤(半年生),红花月季(2年生),亚菊(1年生),洒金桃叶珊瑚(半年生),常春藤(半年生),浓香茉莉(1年生),美丽月见草(1年生),天人菊(1年生),红花继木(1年生),金边黄杨(1年生),花叶玉簪(3年生),熊掌木(2年生),萱草(2年生)。每种苗木随机采集3株,每株采集根和根际土壤500g作为一份样品,共采集样品72份,带回实验室后及时分离。
1.2线虫的分离鉴定
根际土壤样品中植物线虫的分离采用淘洗———过筛———改良贝曼漏斗法分离[1]。分离出来的线虫置于60~65℃水浴中处理2~3min,温和杀死,然后用FG固定液(40%甲醛、甘油、蒸馏水的质量比为10∶1∶89)进行固定。固定后的线虫制成临时玻片标本,在光学显微镜下根据形态特征描述(质量特征)和形态特征测计值(数量特征)进行线虫种类的鉴定。线虫形态特征测计采用deMan公式。线虫分类鉴定主要根据谢辉[2]分类系统,同时参照Hunt[3]的分类系统。
2结果与分析
通过对72份根和根际土壤样品中的寄生线虫进行分离鉴定,初步发现6种根际线虫,分别是不确定矮化线虫,有头矮化线虫,同形真滑刃线虫,燕麦真滑刃线虫,辣椒丝尾垫刃线虫和沼泽丝尾垫刃线虫。
2.1不定矮化线虫(图1A)分类地位:垫刃目Tylenchida刺科Belonolaimidae矮化属Tylencho-rhynchus[4]。
测量值:♀(n=20)L=692.1±62(553.1~818.5)μm;a=28.7±2.7(24.8~34.6);b=5.1±0.5(4.5~6.3);c=13.0±3.2(5.3~17.7);c''''=4.0±2.2(2.5~10.6);V=56.1±2.4(53.4~62.1);V''''=61.4±5.0(58.1~76.5);St=17.7±3.9(11.0~22.7)μm;MBL=16.9±2.2(14.2~20.8)μm;MBW=10.6±2.0(5.7~13.6)μm;tail=51.7±7.9(40.2~68.8)μm。形态描述:雌虫圆筒形,中等大小,虫体经温热杀死后稍向腹面弯曲,少数呈开放螺旋形。体环较细。唇区半圆形,稍缢缩或明显缢缩,少数不缢缩。头架稍硬化。口针强壮,基部球圆形,前缘向后倾斜。中食道球发达,卵形,与食道体部分开。食道峡部窄,食道腺梨形,与肠交界清楚。单卵巢,卵母细胞单列,受精囊圆形,排列对称,充满圆形精子。尾近圆筒形,末端圆,有环纹。雄虫未见。寄主为蒲苇、金森女贞、银枝小蜡、浓香茉莉、美丽月见草。
2.2有头矮化线虫(图1B)分类地位:垫刃目刺科矮化属[5]。
测量值:♀(n=25)L=639.9±41.7(640.2~811.0)μm;a=27.5±2.6(23.3~35.7);b=5.3±0.4(4.6~6.4);c=13.3±2.9(10.7~22.9);c''''=3.6±1.6(2.5~3.6);V=56.2±2.4(51.7~63.9);V''''=61.2±4.4(56.12~79.6);St=21.2±2.4(10.6~23.6)μm;MBL=18.0±2.0(12.7~21.2)μm;MBW=11.6±1.4(10.0~13.37)μm;tail=52.62±7.3(48.0~66.5)μm。形态描述:雌虫虫体经温热杀死后弯曲成“C”形,体纹细。头部较高,唇区圆,突出,基部缢缩。头架较弱,口针强壮,基部球圆形,向后倾斜。中食道球卵圆形,中食道球瓣发达。食道腺长梨形,与肠交界明显。阴门横裂,双生殖腺,对伸,卵母细胞单行排列;受精囊小,内有精子有时不明显。尾近圆锥形,尾端无环纹,形状不一,但常呈心形突出于体环。雄虫未见。寄主为黄菖蒲、金边麦冬、花叶玉簪、金边丝兰、金森女贞、扶芳藤、红花月季、熊掌木、亚菊、常春藤、银枝小蜡、浓香茉莉、美丽月见草、金边黄杨。
2.3同形真滑刃线虫(图1C)分类地位:滑刃目Aphelenchida真滑刃科Aphelenchidae真滑刃属Aphelenchus。
测量值:♀(n=18)L=629.7±81.4(514.7~817.8)μm;a=30.0±2.8(23.2~33.7);b=5.5±0.9(4.2~7.7);b''''=4.5±1.5(2.8~9.5);c=26.6±3.8(16.4~31.6);c''''=2.4±0.3(1.9~3.1);V=76.1±1.2(73~78.1);V''''=79.1±1.6(75.5~82.4);St=15.0±3.0(8.6~19.8)μm;MBL=17.8±2.2(14.6~21.6)μm;MBW=12.2±1.9(9.6~16.8)μm;tail=22.8±4.2(18.4~34.1)μm。形态描述:雌虫体圆筒形,温热杀死后伸直或略向腹面弯曲。体表环纹较细。唇区低,前端平圆,不缢缩。口针较长,无口针基部球。食道前体部圆筒形,后段接近中食道球处稍缢缩;中食道球大,椭圆形,食道峡部很短。食道腺长叶状,从背面覆盖肠。阴门横裂,位于体中后部,阴门唇稍突出,阴道稍向前倾斜。单卵巢,前伸,卵母细胞单行排列。尾圆锥形,末端钝圆或稍平。尾较长,为18.4~34.1μm。雄虫未见。寄主为蒲苇、银边麦冬、金边麦冬、鸢尾、花叶玉簪、金森女贞、扶芳藤、亚菊、洒金桃叶珊瑚、银枝小蜡、浓香茉莉、美丽月见草、天人菊、红花继木。
2.4燕麦真滑刃线虫(图1D)分类地位:滑刃目真滑刃科真滑刃属。
测量值:♀(n=25)L=723.7±98.9(590.6~817.4)μm;a=31.7±1.7(29.2~35.0);b=5.8±0.7(4.6~6.9);b''''=4.1±0.5(3.1~5.0);c=28.6±2.9(22.6~33.4);c''''=2.2±0.3(1.8~2.9);V=76.7±1.4(74.1~79.8);V''''=79.5±1.6(76.5~82.5);St=15.3±2.8(11.3~19.5)μm;MBL=18.9±3.1(15.0~23.0)μm;MBW=11.7±2.0(8.5~16.1)μm;tail=22.4±4.1(15.3~29.5)μm。♂(n=6)SP=27.9±2.7(27.1~29.6)μm;Gub=15.7±1.4(13.8~16.4)μm。形态描述:雌虫虫体圆筒形,两端稍变细。经温热杀死后略向腹面弯曲,在阴门稍前处体最宽。体表环纹细。唇区低,前端平圆,不缢缩。口针较长,长11.3~19.5μm。口针基部稍变粗,无基部球。食道体部圆筒形,中食道球大,呈卵圆形,食道峡部很短,食道腺长叶状,从背面覆盖肠,覆盖长度为体宽的3倍左右。阴门横裂,位于体中后部74%~80%处,阴道壁厚,稍向前倾斜,阴门唇突起。单卵巢,前伸,常延伸到体中部之前,接近食道腺的末端。卵母细胞部分单行排列,部分双行排列。肛门前唇突起。尾较短,圆筒形,末端半圆或宽圆形。雄虫体前部与雌虫相似。交合刺细,长27~30μm,成对。引带长14~16μm。尾圆锥形。有交合伞,具有4对交合伞脊,肛门区1对,尾端3对。寄主为蒲苇、金边麦冬、金森女贞、亚菊、常春藤、浓香茉莉、天人菊。
2.5辣椒丝尾垫刃线虫(图1E)分类地位:垫刃目Tylenchida垫刃科Tylenchidae丝尾垫刃属Filen-chus[6-7]。
测量值:♀(n=50)L=488.0±79.7(374.2~634.2)μm;a=30.5±2.6(25.4~35.2);b=5.7±0.6(4.8~7.0);c=5.4±0.3(4.1~6.3);c''''=10.3±1.2(8.2~12.4);V=63.7±1.9(59.4~67.3);V''''=78.2±2.5(73.7~84.6);St=7.7±1.3(6.2~11.0)μm;MBL=8.92±1.8(6.8~12.7)μm;MBW=5.4±1.3(3.1~7.4)μm;tail=89.3±10.7(73.0~112.1)μm。形态描述:雌虫虫体小,经温热杀死后虫体向腹面弯曲或略直,虫体两端渐变细。角质层环细。头部连续或微缢缩,前端窄、平或平圆,头架骨化弱。口针弱,基部球小,呈凸缘状。食道前体部近柱状;中食道球纺锤形,肌肉质,瓣弱;峡部细。食道腺长梨形,与肠交界清楚。阴门横裂,阴门唇无变化。阴道斜向前伸。单卵巢,前伸,卵母细胞单行排列;受精囊卵圆形,缢缩不明显。尾细长,圆锥形,尾直或后部不规则弯,尾端锐尖或钝尖,尾稍长于肛阴距。雄虫未见。寄主为蒲苇、芦竹、黄菖蒲、银边麦冬、萱草、金边麦冬、鸢尾、花菖蒲、海寿花、熊掌木。
2.6沼泽丝尾垫刃线虫(图1F)分类地位:垫刃目垫刃科丝尾垫刃属[8]。
测量值:♀(n=25)L=512.1±58.0(457.0~685.6)μm;a=33.8±2.3(31.2~38.5);b=5.9±0.6(5.2~7.3);c=4.2±0.6(2.8~5.6);c''''=14.9±2.4(11.0~19.5);V=58.4±3.2(50.2~63.0);V''''=77.2±3.8(62.9~81.3);St=12.7±1.4(11.5~15.2)μm;MBL=9.2±1.6(5.0~13.0)μm;MBW=4.8±1.0(3.0~7.0)μm;tail=123.6±21.0(95.0~177.3)μm。形态描述:雌虫虫体经温热杀死后稍弯曲,尾部直形,具环纹。体前部渐尖,唇区无缢缩,表皮纹细弱。口针长11.5~15.2μm,口针基部球明显。中食道球纺锤形,中食道球腔明显,球形。食道腺倒梨形,与肠分界明显。卵巢直形。尾较长,尾端尖锐。雄虫未见。寄主为芦竹、黄菖蒲、萱草、鸢尾、玉簪、花菖蒲、海寿花、洒金桃叶珊瑚、金边麦冬。
3结论与讨论
从常州金坛一苗圃地24种园林苗木采集的72份根及根际土壤样品,初步分离鉴定出6种线虫。
已有报道从同一苗圃地采集10种园林苗木根际土壤样品分离鉴定出双宫螺旋线虫、林伯滑刃线虫和喜悦平滑垫刃线虫3种寄生线虫[9]。矮化线虫属已报道130多种,主要在根部外寄生,但是在某些条件下也可以侵入根内转为内寄生。不确定矮化线虫的寄主有烟草、玉米、茶等,在广东、贵州等均有分布[6,10]。笔者在蒲苇、金森女贞、银枝小蜡、浓香茉莉和美丽月见草上分离发现,这5种园林苗木均为不确定矮化线虫的新寄主,同时该种线虫亦为江苏省新记录种。有头矮化线虫的寄主有牡丹、香菜等,在天津、新疆等均有分布。笔者在黄菖蒲、金边麦冬、花叶玉簪、金边丝兰、金森女贞、扶芳藤、月季、熊掌木、亚菊、常春藤、银枝小蜡、浓香茉莉、美丽月见草和金边黄杨上分离发现。这14种园林苗木均为有头矮化线虫的新寄主,同时该种线虫亦为江苏省新记录种。真滑刃线虫属世界报道约30个种,我国有10多种[2]。同形真滑刃线虫的寄主有马铃薯、柠檬等,在我国北京、辽宁、山西等均有分布。另外,有报道在江苏的杨树根际土壤中分离到该线虫[11]。
笔者在蒲苇、银边麦冬、金边麦冬、鸢尾、花叶玉簪、金森女贞、扶芳藤、亚菊、洒金桃叶珊瑚、银枝小蜡、浓香茉莉、美丽月见草、天人菊和红花继木上分离发现。这14种园林苗木均为同形真滑刃线虫的新寄主。燕麦真滑刃线虫的寄主植物众多,生长于包括芭蕉、菠萝、辣椒等在内的70多种植物根际土壤中,在我国分布上海、天津、山西、辽宁等14个省市,在江苏省多种苗木根际土壤中也分离得到[12]。另外,有报道该线虫可危害多种蘑菇[10]。笔者在蒲苇、金边麦冬、金森女贞、亚菊、常春藤、浓香茉莉和天人菊上分离发现。除浓香茉莉外,其余6种均为燕麦真滑刃线虫的新寄主。丝尾垫刃属线虫的有效种有80多种,我国报道的有10多种[2]。辣椒丝尾垫刃线虫的寄主有辣椒、西瓜等,在我国香港、上海等均有分布[6,13]。笔者在蒲苇、芦竹、黄菖蒲、银边麦冬、萱草、金边麦冬、鸢尾、花菖蒲、海寿花和熊掌木上分离发现。这10种园林苗木均为辣椒丝尾垫刃线虫的新寄主,同时该种线虫亦为江苏省新记录种。沼泽丝尾垫刃线虫的寄主有大豆等,在我国的吉林有分布。
笔者在芦竹、黄菖蒲、萱草、金边麦冬、鸢尾、玉簪、花菖蒲、海寿花、洒金桃叶珊瑚上分离发现。江苏常州作为全国较大的园林苗木生产基地之一,拥有比较优良的生产出口条件。然而国际口岸对苗木寄生线虫的检疫要求也愈来愈高,寄生线虫已大大制约了常州花木的出口创汇。笔者在前期工作的基础上继续对土壤样品中的寄生线虫进行鉴定,目前鉴定工作已基本结束,共鉴定出常州地区园林苗木根际寄生线虫6属14种,部分属种已另文发表。由于此次研究采集的寄主和地区有限,园林苗木根际寄生线虫的种类应远不止这些,今后还应加强不同地区、不同寄主以及寄主不同部位的寄生线虫种类调查,只有这样,才能为苗木线虫的检疫提供更有价值的参考。