叉尾鮰养殖论文:AOZ在叉尾鮰中的分布与除去规律
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本文作者：刘永涛1,2艾晓辉1,2索纹纹1,3余少梅1,3杨秋红1,2作者单位：1中国水产科学研究院淡水研究中心2中国水产科学研究院长江水产研究所3华中农业大学水产学院
标准曲线方程与相关系数
在1～20.0ng/mL和50.0～1000.0ng/mL范围内aoz线性关系良好，低浓度线性方程为Y=0.0843381+0.355336x;高浓度线性方程为Y=1.08424+4.42862x，相关指数r2均大于0.9994。
方法检测限、回收率与精密度
本试验条件下，血液、肌肉、肝脏、肾脏和皮肤组织中AOZ方法检测限均为0.5μg/kg。各组织中5个质量浓度加标水平的AOZ平均回收率为89.42%～109.53%，测得的日内精密度与日间精密度均小于10%，分析方法满足分析要求。
AOZ在斑点叉尾血液中的浓度
将测到的AOZ的峰面积分别与其氘代同位素内标峰面的比值代入标准曲线方程，可以求出AOZ在斑点叉尾血液中的浓度值(见表3)。由表3可以看出，AOZ峰浓度出现在4h，浓度为(2649.0±463.1)ng/mL，1440h(60d)时浓度为(6.66±4.47)ng/mL，2160h(90d)后才检测不到AOZ。由于AOZ与血液中蛋白质结合紧密，只有在强酸性条件下才能被水解下来，而鱼体血液一般成弱碱性，因此，AOZ不易被消除。
AOZ在斑点叉尾肌肉中4h达到峰浓度(1169.37±194.45)μg/kg，1440h(60d)时浓度为(4.50±1.55)μg/kg，2160h(90d)时肌肉中未检出AOZ。AOZ在斑点叉尾皮肤中4h达到峰浓度(2308.49±100.45)μg/kg，1440h(60d)时浓度为(33.65±15.53)μg/kg，2160h(90d)时皮肤中未检出AOZ。AOZ在斑点叉尾肝脏中4h达到峰浓度(7816.2±568.5)μg/kg，1440h(60d)时浓度为(17.1±9.8)μg/kg，2160h(90d)时肝脏中未检出AOZ。斑点叉尾肾脏中AOZ在4h达到峰浓度为15938.13μg/kg，1440h(60d)时浓度为21.30μg/kg，2160h(90d)时肾脏中未检出AOZ(表4)。上述结果表明AOZ在斑点叉尾各组织中不易消除，各组织中AOZ至少需要2754℃•d才能消除。数据经回归处理得到组织中药物浓度(C)与时间(t)关系的消除曲线方程、相关指数(r2)及消除半衰期(T1/2)，(见表5)。AOZ在4种组织中的消除半衰期T1/2皮肤＞肌肉＞血液＞肝脏＞肾脏。图1－图6中每个图的4个离子色谱峰分别为AOZ的母离子m/z236，2个子离子m/z104、m/z134的色谱峰和AOZ-D4的子离子m/z134的色谱峰。根据欧盟96/23/EC［16］指令附录Ⅰ的A组物质(包括AOZ)的确认需要最少4个识别点，而LC-MS-MS1个母离子+2个子离子的识别点数为4，因此，采用该方法可以对AOZ进行定性定量分析。
呋喃唑酮原药在动物体内被迅速代谢，被代谢的主要产物为AOZ，而AOZ在动物体内却很难消除。欧盟、美国、日本和我国等国家和组织均通过检测呋喃唑酮的主要代谢物AOZ来监测呋喃唑酮的使用情况，并规定硝基呋喃类药物的代谢物作为残留检测的标示物其最高残留限量(MRL)为1μg/kg［17］。徐维海等［13］报道，给罗非鱼投喂剂量为30mg/(kg•d)的呋喃唑酮药饵7d，实验水温为(27±2)℃，罗非鱼肌肉中AOZ最高浓度为(31.19±9.68)μg/kg，建议罗非鱼的休药期至少为22d;谭志军等［5］报道，在水温保持在(17±1)℃，投喂(400.0±50.0)g大菱鲆15mg/kg药饵，每天投喂2次，投喂5d，其肌肉中的AOZ最高浓度为(1201.93±36.24)μg/kg，185d时仍有(29.68±4.11)μg/kg;而本试验AOZ在斑点叉尾肌肉中的最高浓度为(1169.4±194.5)μg/kg，60d时AOZ仍有(4.50±1.55)μg/kg，90d时才未检测到，从上述试验结果可以看出水产动物品种、规格不同，试验水温等条件都会造成AOZ在鱼体中残留浓度和时间存在较大差异，但总体来看AOZ在水产动物体内残留时间较长，这与AOZ与动物体内蛋白质结合紧密不易被代谢和排泄的存在状态有关。
本试验在设计水产动物药物代谢及残留试验时尽量按照生产实际的用药方式和养殖方式进行，以期获得与实际生产情况接近的数据。在本试验条件下血液、肌肉、皮肤、肝脏、肾脏中AOZ均在停药后4h时达到最高浓度，1440h(60d)时血液和各组织中AOZ均有检出浓度，分别是其判定限1μg/kg的6.66、4.5、33.7、17.1和21.3倍。血液和各组织中AOZ在2160h(90d)时才未被检测到。按组织中AOZ浓度水平由高到低排列的顺序为肾脏＞肝脏＞皮肤＞血液＞肌肉，同一时间点肾脏组织较其它组织浓度高，这可能与肾脏组织作为AOZ的排泄组织，并蓄积了较高浓度的AOZ有关。消除半衰期从试验结果来看皮肤的消除半衰期最长，其次为肌肉组织，这2种组织的消除半衰期均长于肝脏和肾脏。主要原因可能是AOZ通常在体内以共价键形式与蛋白质结合紧密形成较稳定的残留，肝脏中肝微粒体可以将部分AOZ降解成乙醇肼［18］，而肾脏可以排泄部分AOZ，因此，其消除半衰期较皮肤和肌肉短。皮肤作为可食组织的一部分AOZ的浓度高于肌肉组织，而目前我国对于水产品中AOZ的监控主要是鱼体的肌肉组织，因此，建议相关部门将水产动物的可食组织皮肤和肌肉一起列为检测靶组织。
