和胃止痛片薄层鉴别论文

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【摘要】目的建立和胃止痛片的质量标准。方法采用高效液相色谱法测定方中黄连药材中盐酸小檗碱（C20H17NO4·HCl）的含量。并同时对黄连、延胡索、木香进行薄层鉴别。结果盐酸小檗碱含量测定进样量在0.085～0.850μg有良好的线性，r=0.9999，平均回收率96.7%，RSD为1.53%。TLC定性鉴别阴性无干扰，对照品与供试品溶液斑点对应整齐、清晰。结论该检测方法方便，准确，重现性好，可用于该制剂的质量控制。

【关键词】和胃止痛片；薄层鉴别；高效液相色谱法；盐酸小檗碱

前言

和胃止痛片收载于《国家中成药标准汇编·中成药地方标准上升国家标准部分》，由大红袍、鸡矢藤、管仲、金荞麦、黄连、砂仁、延胡索、木香8味药材组成。功能主治彝医：猜尼围快，围斯希；中医：行气活血，和胃止痛。用于肝胃气滞，湿热淤阻所致的急慢性胃肠炎、胃及十二指肠溃疡、慢性结肠炎。和胃止痛片是中成药中治疗这类疾病的良药，市场需求量大。为了控制质量笔者对方中的黄连、延胡索、木香进行薄层鉴别，用高效液相色谱法对黄连中的盐酸小檗碱的含量测定进行了研究。

1仪器与试药

1.1仪器

AgilentG1311AQuatPump，G1314AVWD，G1379ADEGASSER，AT-330柱温箱，XtemaRp18（150mm×3.9mm，5μm）色谱柱，塞多利斯全自动电子天平(德国塞多利斯)。

1.2试药硅胶G（青岛海洋化工厂）;色谱纯乙腈;其它试剂均为分析纯；盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所提供，编号为110713-200208，为供含量测定用）;延胡索乙素对照品（中国药品生物制品检验所提供，延胡索乙素对照品批号：110726-200208,供定性测定用）;和胃止痛片样品（自制）。

2方法与结果

2.1定性鉴别

2.1.1黄连的薄层鉴别［1］

取本品25片，研细，加氨试液1.5ml使润湿，加三氯甲烷30ml，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄连对照药材0.5g和处方中不含黄连药材按制备方法制成阴性样品，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述3种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7∶1∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照无干扰。见图1。

2.1.2延胡索的薄层鉴别［2］

取本品50片，研细，加甲醇50ml，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用浓氨试液调节pH值至8～10，用乙醚振摇提取3次，15ml/次，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。另取处方中不含延胡索药材按制备方法制成阴性样品，再按供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮（9∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰。日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在空气中挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照无干扰。见图2。

2.1.3木香的薄层鉴别

取本品10片，研细，加三氯甲烷10ml，超声处理30min，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。取去氢木香内酯和木香烃内酯对照品适量，加甲醇制成每毫升各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。另取处方中不含木香药材按制备方法制成的阴性样品再按供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-环己烷（5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。见图3。

2.2含量测定

2.2.1对照品溶液的制备精密称取在100℃干燥5h的盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每毫升中含盐酸小檗碱60μg的溶液，过滤即得。

2.2.2供试品溶液的制备［3］取本品10片，除去包衣，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率90W，频率59kHz）40min，取出，放冷再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3色谱条件与实验结果色谱柱：XtemaRp18（150mm×3.9mm，5μm）；柱温：30℃；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（40∶60）（每100ml加十二烷基磺酸钠0.1g）；检测波长265nm；流速1ml/min，照此条件分析，制剂中的盐酸小檗碱的主峰和其它组分均能达到基线分离。对照品溶液、供试品溶液及缺黄连的阴性对照品溶液的色谱图。见图4～6。

2.2.4线性范围的考察精密称取盐酸小檗碱对照品17.0mg，置25ml量瓶中，加80%甲醇溶液使溶解，并稀释至刻度，摇匀（浓度为680μg/ml），再分别精密吸取对照品母液适量，用80%甲醇溶液稀释成不同浓度的对照品溶液：17.0，34.0，68.0，85.0，170.0μg/ml。分别精密吸取上述不同浓度的对照品溶液各5μl，按正文中色谱条件分析进样，以峰面积积分值为纵坐标，盐酸小檗碱的量为横坐标绘制标准曲线（图7）,计算得盐酸小檗碱回归方程：Y=3685.12628X+15.65202017，r=0.99993。表明盐酸小檗碱进样量在0.085～0.850μg范围内具有良好线性关系。

2.2.5精密度实验精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液(68.0μg/ml)5μl，重复进样5次，按上述色谱条件测定峰面积。求相对标准偏差以盐酸小檗碱峰面积积分值计RSD为0.54%。表明仪器精密性良好。

2.2.6重现性实验分别取同一批（20051001）和胃止痛片样品5份，按正文中含量测定项下方法实验，测定盐酸小檗碱的含量。样品中盐酸小檗碱含量的相对标准偏差为0.57%，表明此法重现性良好。

2.2.7稳定性实验取上述标准曲线项下的盐酸小檗碱对照品溶液(68.0μg/ml)及和胃止痛片供试品溶液各5μl，分别在0，2，4，6，8，12进样，按正文中含量测定项下条件测定对照品、供试品在0～12h内峰面积的RSD分别为0.76%，0.81%，表明对照品、供试品放置12h内基本稳定。

2.2.8加样回收率实验精密称取盐酸小檗碱对照品（100℃干燥5h）15.4mg，置10ml量瓶中，加80%甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成（1.54mg/ml）对照品溶液。取同一批（20051001）已知含量的和胃止痛片（5.79mg/g）精密称取样品各5份，每份约0.25g，分别精密加入上述盐酸小檗碱对照品溶液各1ml，按正文中含量测定项下方法测定供试品溶液并测定其盐酸小檗碱的含量。平均回收率为96.7%，相对标准偏差为1.53%，表明此法回收率良好。结果见表1。表1加样回收率实验结果（略）超级秘书网

2.2.9样品含量测定取本品10批，按正文中含量测定项下方法测定。结果见表2。表210批和胃止痛片样品含量测定结果（略）

3讨论

实验过程中对盐酸小檗碱对照品的80%甲醇溶液进行停泵扫描，波长范围为190nm至400nm。结果盐酸小檗碱的紫外特征吸收最大265nm，由于在265nm处检测系统易稳定，峰形好、响应大，确定265nm为检测波长。

由于不同产地及采收时间等原因导致黄连药材中的盐酸小檗碱的含量有高有低，结合以上10批样品中盐酸小檗碱的含量测定结果，将本品中盐酸小檗碱的含量定为每片含黄连以盐酸小檗碱计，应不得少于0.70mg。

【参考文献】

［1］余小婷，幸而，黄红雯.和胃止痛胶囊质量标准研究［J］.中南药学，2004，2（5）：291.

［2］朴惠善，沈光海，郑云花，等.紫外分光光度法测定关苍术复方制剂中延胡索乙素含量［J］.延边医学院学报，1996，19(1)：11.

［3］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：213，附录VIB.