TK对脑缺血NGF的影响研究

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本文作者：边颖1王金春1商艳君2作者单位：1.沈阳市第五人民医院神经内一科2.辽宁工业大学医院内科

检测指标及方法

1神经功能缺失评分

实验前先对大鼠进行训练，采用神经损伤评分［4］(NSS)。术后第1天，NSS8～12分的大鼠进入本实验。术后第1、3、7天，对3组大鼠进行评分及方差分析。

2脑梗死体积测定

将大脑由额极至枕极分为5枚脑片，2mm/片，立即置于2%TTC(红四氮唑)溶液中，37℃水浴30min，4%多聚甲醛固定30min。显微图像分析系统采集每片脑切片上、下面图像，分析每片脑切片上、下面脑梗死面积。根据梯形法则计算脑梗死体积。

3免疫组化染色

梗死后3d，将大鼠用10%水合氯醛麻醉，4%多聚甲醛心内灌注后取脑，固定24h，组织脱水包埋。在梗死灶中心部位，相当于以前囟为中心，冠状面+1～－1mm，每隔100μm，连续7μm切片5张，对NGF进行免疫组化染色。一抗为兔抗NGF(1∶200)，二抗为生物素化羊抗兔IgG。显色底物为DAB显色剂。

4NGF测定

将染色后的脑组织切片取梗死周围皮质，进行显微图像采集、分析(MetaMorph/DP10/BX41)，记录经过处理软件包量化后的灰度值。

5统计学方法

用SPSS11.0统计软件做方差分析。数据以均数±标准差(x珋±s)表示，P＜0.05为差异有统计学意义。

结果

1NSS评分

3组神经功能缺损减轻。tk组第3天NSS评分与其他2组的差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

2动物模型经切片、TTC(红四氮唑)染色见图1～图2。

3脑梗死体积的比较

3组均有梗死灶形成，但TK组梗死灶体积(30.54%±3.47%)较NS组、空白对照组(38.43%±5.73%，39.67%±4.98%)明显减轻(P＜0.05)。

4缺血区NGF免疫组化结果

大脑中动脉闭塞后脑缺血区ngf增多，而注射TK后，NGF细胞明显增多，TK组与其他2组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表2及图3～图4。

讨论

有学者提出，脑组织缺血性损伤早期，如果KKS受到激活而参与一系列的生理生化反应，可以加重脑组织损伤，原因为KKS增加通透性和脑水肿［6］。Zausinger等［7］研究显示，在局灶性脑缺血前30min给予激肽B2受体拮抗剂(LF16－0687MS)，可加快缺血性脑组织的功能恢复。另外，Xia等［8］提出，在脑组织缺血后8h，给予不同的治疗，结果不同:注射人TK基因可使大鼠缺血性脑梗死的体积缩小;而LF16－0687MS能加重缺血性脑梗死的再灌注损伤。得出不同的结论与TK治疗的时间有关:TK在早期可使脑水肿加重，但后期却能通过抑制细胞凋亡而起到神经保护作用。倪耀辉等［9］研究显示，在大鼠脑缺血再灌注后8h给予TK，对脑缺血有明显的治疗作用，可减轻炎性反应，同时还能降低梗死灶内的细胞凋亡;明显增加缺血区神经细胞、神经胶质细胞和血管上皮细胞的增生。因此，推断TK是通过促进血管、神经组织再生以及抑制局灶缺血区的细胞凋亡、炎性反应而发挥治疗作用［10－11］。

本研究显示，在大鼠大脑中动脉闭塞再灌注后8h注射TK，可改善大鼠的神经功能缺损，并减少大鼠脑梗死体积，使脑缺血区NGF表达增多。结果表明，在脑缺血较晚期，TK有明显的治疗效果。另外，应用TK治疗能明显增加缺血区的NGF表达，表明脑梗死时，TK有促进神经细胞再生的作用。NGF能加速神经元生长、分化及维持其功能，在脑内能保护神经元抵御很多类型的损伤。因此，得出结论，通过保护神经元、促进轴突再生而减轻中枢神经系统损伤。这为临床应用TK治疗缺血性脑梗死提供了重要的理论依据。