杜仲降压片思考

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1实验材料

1.1实验仪器

日立-2130高压恒流输液泵、日立-2400紫外可变波长检测器由日立分析仪器有限公司生产，N2000色谱数据处理工作站由浙江大学智达信息工程有限公司生产。

1.2药品与试剂

实验用药材购自医药公司，经检验符合药典规定；杜仲降压片由贵州百花医药集团有限公司生产，批号060516；钩藤对照药材（121190-200402）、盐酸水苏碱（110712-200306）、黄芩苷（110715-200212）对照品由中国药品生物制品检定所提供。实验所用试剂除另有规定外，均为分析纯，色谱用试剂乙腈为色谱纯，水为重蒸水。

2方法与结果

2．1益母草薄层色谱鉴别

益母草中含有盐酸水苏碱，参照《中国药典》2005年版一部［1］益母草膏项下薄层鉴别方法：取本品40片，去包衣，研细，称取10g，加水20mL，搅拌，加稀盐酸调节pH值为1～2，离心，取上清液加在强酸性阳离子交换树脂柱上，以水洗至流出液近无色，弃去水液，再以2mol/L氨溶液40mL洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。按处方比例及制法制备缺益母草的阴性对照品，按供试品溶液的制备方法同法制成阴性对照溶液。另取盐酸水苏碱对照品适量，加甲醇制成1mg/mL的溶液，作为对照品溶液。按照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法，吸取上述溶液各10μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇-盐酸-醋酸乙脂（8∶3∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试剂。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照色谱在相应位置上无斑点，即阴性无干扰。结果见图1。

2．2钩藤薄层色谱鉴别

钩藤主要成分为生物碱，我们根据生物碱的性质，参照文献［3］的方法来制备样品溶液和阴性对照溶液，与钩藤对照药材对照。参照文献［4］方法进行展开和显色。取本品20片，去包衣，研细，称取6g，加80%乙醇100mL，置水浴上加热回流30min，滤过；残留物加1%盐酸5mL使溶解，滤过，滤液用氨水调pH至9，用氯仿萃取2次，每次10mL，氯仿液浓缩至干，加0.5mL乙醇溶解作为供试品溶液。按处方比例及制法制备缺钩藤的阴性样品，按供试品溶液的制备方法同法制成阴性对照溶液。另取钩藤对照药材2g，同法制成对照药材溶液。参照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法，吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-氨水（20∶1∶1）下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试剂。结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的两个橙红色斑点，阴性对照色谱在相应的位置上无斑点。结果见图2。

2.3黄芩苷的含量测定［5］

2.3.1色谱分析条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇－水－磷酸（45∶55∶0.2）为流动相，流速1.0mL/min，检测波长为315nm。理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于2000。

2.3.2供试品溶液的制备与测定取本品10片，去包衣，研碎，混匀，取约0.25g，精密称定，置于50mL具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇30mL，密闭，超声处理30min，摇匀，滤过，滤液置50mL容量瓶中，药渣及滤器用70%乙醇适量洗涤，洗液并入同一容量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。HPLC测定结果见图3。

2.3.3对照品溶液的制备与测定精密称取减压干燥4h的黄芩苷对照品10mg，置100mL容量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得（每毫升含黄芩苷0.1mg）。HPLC测定结果见图4。

2.3.4阴性对照溶液制备与测定按处方比例及制法制备缺黄芩的阴性对照品，按供试品溶液的制备方法同法制成阴性对照溶液。经进样检测阴性对照图谱中在与黄芩苷峰相同保留时间处未见干扰。结果见图5。

2.3.5标准曲线的制备精密称取黄芩苷对照品，制成浓度为0.1mg/mL的样品，分别进样2.5μL、5.0μL、10μL、15μL、20μL测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，黄芩苷进样量为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=185755X+23136，r=0.9999。表明黄芩苷在0.25μg～2μg之间呈良好的线性关系。

2.3.6精密度测定试验取同一对照品溶液10L，注入高效液相色谱仪，重复进样5次，测定黄芩苷峰面积，并计算相对标准偏差RSD为1.23%。

2.3.7稳定性试验取同一供试品溶液，每隔2h进样一次，共进样5次，按上述色谱条件测定黄芩苷峰面积，并计算黄芩苷峰面积积分值的相对标准偏差RSD为0.8%（n=5），表明供试品溶液在8h内基本稳定。

2.3.8重现性实验取同一批号（批号：060516）供试品，按供试品溶液制备方法制备5份供试液，分别测定黄芩苷峰面积，并计算黄芩苷含量和相对标准偏差。结果黄芩苷平均含量为5.78mg/片，RSD为1.88%。

2.3.9加样回收率试验取同一批号已知含量供试品（批号：060516；黄芩苷含量5.78mg/片）20片，去包衣，研碎，混匀，取0.125g，精密称定，共取5份，均加入黄芩苷对照品2.4mg，按照供试品溶液制备方法制备供试液，进样量10μL，测定黄芩苷峰面积，计算黄芩苷含量，并计算加样回收率，结果见表1。

2.3.10样品含量测定分别吸取对照品溶液及供试品溶液各10μL注入色谱仪，测得峰面积，以外标法计算黄芩苷含量。结果见表2。

3讨论

杜仲降压片的君药为杜仲，主含木脂素、环烯醚萜类及杜仲胶等成分，降压成分为松脂醇-二葡萄糖苷，但中国药品生物制品检定所未能提供相应对照品，故无法进行定量测定。黄芩为方中臣药，采用HPLC法测定制剂中黄芩苷含量，方法简单，重复性好，可以作为含量测定指标。

【参考文献】

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：化学工业出版社，2005.

［2］王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究［M］.北京：中国医药科技出版社，1994：209-211.

［3］陈黄保.七星茶中钩藤及防风的薄层色谱鉴别［J］.广东药学，1994（4）：21.

［4］张榕，张春兰，方平飞，等.天麻钩藤颗粒的薄层色谱研究［J］.华西药学杂志，2001，16（5）：384-386.

［5］梁建宁，李波.复方杜仲片质量标准研究［J］.中南药学，2004，2（4）：2-4.

【摘要】目的：探讨并制定杜仲降压片的质量标准。方法:采用TCL法对杜仲降压片中的益母草、钩藤进行定性鉴别，采用HPLC法测定黄芩苷的含量。结果:益母草、钩藤薄层色谱图斑点清晰，重现性好，无干扰。黄芩苷在0.25μg～2μg之间呈良好的线性关系（r=0.9999）。结论:所建立的方法准确可靠，可用于该制剂的质量控制。

【关键词】杜仲降压片；TLC；HPLC；质量标准