竺黄复方片测试甘草酸讨论

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【摘要】目的采用反相高效液相色谱（RPHPLC）法测定竺黄复方片中甘草酸的含量。方法采用kromasilC18柱（200mm×4.6mm,5μm），以甲醇-0.2mol·L-1乙酸铵-冰乙酸（65∶35∶1）为流动相，流速1ml·min-1，柱温30℃，检测波长250nm。结果在0.402～2.010μg之间，峰面积与进样量的线性关系为A=673028.2878C-67302.7076（r=0.9998），平均回收率为99.66％。测得3批样品中甘草酸的含量（以甘草酸铵计）分别为1.034，1.103和1.008mg/片。结论所建方法简便、准确、重复性好，可用于竺黄复方片的质量控制。

【关键词】竺黄复方片；甘草酸；反相高效液相色谱法

Abstract：ObjectiveToestablishanHPLCmethodtodetermineglycyrrhizicacidfromprescriptionofZhuhuangTablet.MethodsThecolumnwaskromasilC18(200mm×4.6mm,5μm),themobilephaseconsistedofMethanol～0.2mol·L-1Ammoniumacetate-Glacialacrticacid(65:35:1),withtheflowrateof1ml·min-1andtheUVdetectorwassetat250nm.ResultsThemethodshowedagoodrangeof0.402～2.010μg(r=0.9998).Theaveragerecoverywas99.66%.Theglycyrrhizicacidcontentsofthreebatchsampleswere1.034,1.103，1.008mg,respectively.ConclusionThismethodissimple,accurate,repeatableandsuitableforthedeterminationofglycyrrhizicacidinprescriptionofZhuhuangTablet.

Keywords：PrescriptionofZhuhuangTablet；Glycyrrhizicacid;RP–HPLC

竺黄复方片由甘草、力嘎都、牛黄、红花、榜嘎（唐古特乌头）等九味药材组成，具有利肺、消炎、止痛的功效，用于小儿流感引起的肺炎、上呼吸道感染等［1］。该方标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》藏药第一册，标准未收载鉴别项和含量测定项，不利于生产和使用的相关部门控制其药品质量。本文拟建立甘草酸含量测定方法，增加含量测定项，提高其质量标准。

1材料

Waters2695/2690分离系统，2996（2487）检测器，Empower色谱管理系统，岛津UV-2100型紫外分光光度计，AtutoScienceAS5150超声波清洗仪，Sartorius公司BP211D电子天平。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1甘草酸的含量测定

2.1.1色谱条件和系统适用性实验用kromasil色谱柱（200mm×4.6mm,5μm），流动相为甲醇-0.2mol·L-1乙酸铵-冰乙酸（65∶35∶1），流速1ml·min-1，柱温：30℃，检测波长250nm［2］，按甘草酸铵峰计，色谱柱理论塔板数不低于2000，甘草酸铵峰与其它峰达到基线分离，峰形对称，色谱图见图1。

2.1.2溶液的制备对照品溶液的制备：精密称取甘草酸铵对照品适量，置10ml量瓶中，加甲醇-0.2mol·L-1乙酸铵-冰乙酸（65∶35∶1）溶解并稀释至刻度，摇匀,使成为每毫升中含对照品0.201mg的溶液即得。

样品溶液的制备：取竺黄复方片适量，研细，取1.5g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-0.2mol·L-1乙酸铵-冰乙酸（65∶35∶1）溶液45ml，称定重量，超声处理30min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，用0.45μm滤膜滤过即得。

阴性样品溶液的制备：取缺甘草的阴性样品，照上述样品溶液制备方法处理即得阴性样品溶液。

2.2方法学考察

2.2.1线性范围精密量取上述甘草酸铵对照品溶液2，4，6，8，10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积，并以峰面积A为纵坐标，进样量C（μg）为横坐标，进行回归，得回归方程：A=673028.2878C-67302.7076，甘草酸铵在0.402～2.010μg之间，进样量与峰面积线性关系良好（r=0.9998）。

2.2.2精密度实验精密吸取对照品溶液10μl，连续进样5次，甘草酸铵峰面积的RSD为0.97％，表明仪器精密度良好。

2.2.3重复性实验取竺黄复方片品（批号20040301）研细，取1.5g，5份，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-0.2mol·L-1乙酸铵-冰乙酸（65∶35∶1）溶液45ml，称定重量，超声处理30min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。按上述色谱条件测定，记录色谱图，并计算含量，结果甘草酸含量（以甘草酸铵计）平均含量为2.75mg·g-1,RSD为1.81％。上述实验表明，该方法的精密度较好。

2.2.4稳定性实验取样品供试液（批号20040301）与甘草酸铵对照品分别于0，2，4，6，8h，分别进样10μl注入色谱仪，记录峰面积，平均峰面积为533271，RSD为1.97%,说明样品溶液8h内稳定。

2.2.5加样回收率实验精密量取甘草酸铵对照品溶液（0.2010mg/ml）10ml，5份，分别置100ml具塞锥形瓶中，水浴上挥干甲醇，取已知含量的样品（批号20040301）约0.8g，5份，精密称定，置上述锥形瓶中，加入甲醇-0.2mol·L-1乙酸铵-冰乙酸（65∶35∶1）溶液45ml，称定重量，超声处理30min，放冷，称定重量，用上述溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取上清液，用0.45μm过滤膜过滤，作为供试品溶液。按上述色谱条件，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，并计算回收率。结果见表1。表1加样回收率实验结果（略）

2.2.6专属性考察精密吸取阴性样品溶液10μl，注入色谱仪，结果表明干草酸铵位置上无干扰峰。

2.2.7样品测定样品按2.1.2项下方法制备样品溶液后，再按上述重复性试验项下方法测定含量。3批样品中甘草酸铵含量分别为1.034，1.103和1.008mg/片。

3讨论

在甘草酸的含量测定中，提取溶媒比较了甲醇提取和流动相提取，结果表明用流动相提取效果更佳。

本实验用RP–HPLC法测定竺黄复方片中甘草酸的含量，所建方法简便、准确、重复性好，可用于竺黄复方片的质量控制。

【参考文献】

［1］国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准·藏药，第一册［S］.1995:251.

［2］国家药典委员会．中国药典,Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：59.