肺癌增殖论文：WT1与肺癌增殖的关联浅析
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本文作者：徐彩华吴晨陈亦江作者单位：南京医科大学第一附属医院胸心外科
实时荧光定量PCR检测结果显示，在79例非小细胞肺癌组织中，WT1mRNA的相对表达量（4.5×10－3）是相应癌旁组织相对表达量（1.7×10－3）的2.6倍，差异有统计学意义（P＜0.01，图1）。
成功构建重组质粒pLV-GFP-WT1
构建的重组质粒pLV-GFP-WT1经PCR和0.8%琼脂糖凝胶电泳鉴定，获得片段大小正确（1500bp）的克隆（图2）。挑选PCR鉴定正确的克隆进行测序，测序结果证明与GenBank数据库中WT1（NM_024426.4）比对正确，表明重组质粒pLV-GFP-WT1构建成功。
蛋白质印迹法检测重组质粒pLV-GFP-WT1转染后H1299细胞中WT1蛋白的表达
蛋白质印迹法检测结果显示，重组质粒pLV-GFP-WT1转染后24、36、48和60h，pLV-GFP-WT1转染组细胞中WT1蛋白表达水平明显高于对照组和Lipo组（图3），说明高表达WT1的肺癌H1299细胞构建成功。
WT1促进非小细胞肺癌H1299细胞的增殖
CCK-8检测结果显示，WT1过表达组在质粒转染后24、36和48h时的D值高于对照组（P＜0.05），对照组和Lipo组细胞在每个时间点的D值之间无明显差异（P＞0.05）。从质粒转染后24h开始，WT1过表达组细胞的细胞增殖率开始增加（17.6%）；质粒转染后36h，WT1过表达组细胞的细胞增殖率达到最高（28.3%）；质粒转染后48h，WT1过表达组细胞的细胞增殖率有所下降（21.1%）；质粒转染后60h，WT1过表达组细胞的增殖率（7.9%）进一步下降（表1）。
本研究发现，WT1在非小细胞肺癌组织中的表达量显著高于相应癌旁组织，其高表达能显著促进非小细胞肺癌的增殖，并在非小细胞肺癌中扮演癌基因的角色。
WT1基因定位于染色体11p13q上，是一个非常重要并有多种功能的基因[11,12]。它首先作为肿瘤的抑癌基因被发现，也是最为人熟知的抑癌基因之一。但很多证据证明，它在某些肿瘤中作为癌基因存在[13-15]。比如：WT1在白血病、乳腺癌和恶性间皮瘤等中高表达[14,16-18]。同时，Vicent等[9]发现，无论是在人肺癌细胞还是小鼠肺癌细胞中，WT1的缺失降低了细胞的增殖，但对细胞凋亡的影响非常小，他们认为WT1的缺失和WT1高表达可能带来的是截然不同的结果。
本研究收集了79例非小细胞肺癌及其相应癌旁组织标本，并对其进行了实时荧光定量PCR检测，结果发现WT1mRNA在非小细胞肺癌组织中的表达水平明显高于相应的癌旁组织（P＜0.01），说明非小细胞肺癌的发生与WT1基因有着密切的关系，WT1基因高表达可能会促进肺癌组织的生长，与肺癌的发生、发展有关。这对肺癌患者的预后是不利的。
本研究将重组质粒pLV-GFP-WT1转染至非小细胞肺癌H1299细胞中，对转染后的细胞增殖情况进行检测，结果发现转染重组质粒pLV-GFP-WT1后24、36和48h的H1299细胞，其增殖率高于对照组，36h时细胞增殖率最高达28.3%，36h后细胞增殖率逐渐下降。笔者推测，这种现象可能是由于脂质体瞬时转染的方法并没有把目的基因融合到宿主基因组中，转染刚开始WT1基因在细胞中的表达量逐渐增加，对细胞增殖的作用也相应增加，在转染后36h达到顶峰；但随着细胞分裂，WT1基因在细胞内逐渐丢失，细胞内表达量下降，导致细胞增殖率下降。
本研究通过临床标本检测和体外细胞实验发现，WT1基因在非小细胞肺癌中表达水平较高，对非小细胞肺癌H1299细胞的生长起促进作用，WT1基因在非小细胞肺癌中扮演着癌基因的角色。本研究小组后续将进一步研究WT1基因对非小细胞肺癌是否存在抗凋亡作用以及WT1基因在裸鼠体内的成瘤情况。相信在不远的将来，也许WT1基因将会像上皮生长因子一样，成为非小细胞肺癌诊断和治疗的一个新靶点。
